Biologie moléculaire

Biologie moléculaire

La plateforme de biologie moléculaire assure les activités suivantes:

  • le design des systèmes d’expression incluant la sélection des souches, des vecteurs d’expression, des marqueurs de sélection, des promoteurs, des peptides signaux, des séquences codantes ainsi que du mode d’optimisation des codons
  • la construction des vecteurs d’expression
  • les étapes de transformation et de sélection des clones surproducteurs
  • la production de banques cellulaires

Deux systèmes d’expression microbiens sont proposés pour l’expression de protéines recombinantes et pour la production d’ADN plasmidien: Escherichia coli and Pichia pastoris.

Les techniques les plus récentes sont utilisées pour le design et la construction des vecteurs d’expression.

Pichia pastoris

Pichia pastorisCette levure possède la capacité de produire et de sécréter dans le milieu de culture de grandes quantités de protéines, ce qui en facilite la récupération, diminue la contamination par les protéines intrinsèques de l’organisme producteur et facilite la purification.

Escherichia coli

Pour l’expression de protéines, deux types de constructions (avec et sans peptide signal) basées sur des souches sélectionnées de E. coli (BL21, BL21/DE3) sont proposés permettant au final trois stratégies d’expression:

  • expression cytoplasmique sous forme soluble
  • expression cytoplasmique sous forme de corps d’inclusion
  • expression périplasmique 

Des souches sélectionnées d’E. coli (DH5α, DH10b) sont utilisées pour la production d’ADN plasmidien.